Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
любом случае не превышающего 30 минут. Дальнейшие серийные десятикратные разведения могут быть приготовлены с использованием буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0, содержащего стерильный полисорбат 80 или другой стерильный поверхностно-активный агент в подходящей концентрации.
Трансдермальные пластыри. Десять пластырей освобождают от защитного покрытия с помощью стерильного пинцета и помещают в стерильные пластмассовые или стеклянные лотки клейкой поверхностью вверх. При необходимости клейкую поверхность накрывают стерильной марлей или сеткой из полимерного моноволокна типа тканого фильтра и переносят 10 пластырей в емкость, вмещающую не менее 500 мл буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0, содержащего подходящий инактиватор, например, полисорбат 80 или лецитин. Энергично встряхивают не менее 30 минут (образец А). Другую группу из 10 пластырей готовят аналогичным образом и помещают в емкость, содержащую не менее 500 мл жидкой питательной среды D, и энергично встряхивают не менее 30 минут (образец B).
ИСПЫТАНИЕ ОБРАЗЦА
Мембранная фильтрация. Используют мембранные фильтры с номинальным размером пор, не превышающим 0,45 мкм, с установленной способностью к удерживанию бактерий. Тип фильтрующего материала выбирают таким образом, чтобы компоненты испытуемого образца не влияли на эффективность удерживания бактерий. Например, фильтры на основе нитрата целлюлозы используют для водных, масляных и разбавленных спиртовых растворов, а фильтры на основе ацетата целлюлозы - в частности, для растворов с высоким содержанием спирта. Конструкция аппарата для фильтрования должна обеспечивать перенос фильтра на питательную среду.
Подходящее количество образца, приготовленного в соответствии с указаниями раздела «Подготовка образца» (предпочтительно, соответствующее 1 г продукта, или меньшему количеству, если ожидается наличие большого числа колониеобразующих единиц), наносят на каждый из двух мембранных фильтров и немедленно фильтруют. Каждый фильтр промывают тремя порциями, приблизительно по 100 мл каждая, подходящей жидкости, например, буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0. К этому раствору могут быть добавлены поверхностно активные агенты, например, полисорбат-80, или инактиваторы антимикробных компонентов. Допускается проведение менее трех промывок, при условии проведения проверки пригодности такой методики. Один из мембранных фильтров, предназначенный преимущественно для подсчета бактерий, переносят на поверхность чашки с подходящей агаризованной средой, например, агаризо-ванной средой В # или средой №1, а другой, предназначенный преимущественно для подсчета грибов, - на поверхность чашки с подходящей агаризованной средой, например, агаризованной средой С # или средой №2. Чашку с агаризованной средой В (# средой №1) инкубируют при температуре от 300С до350С, а чашку с агаризованной средой С (# средой №2) - при температуре от 200С до 250С в течение 5 дней, если за более короткое время не могут быть получены достоверные результаты. Выбирают чашки с максимальным количеством колоний менее 100 и вычисляют количество колониеобразующих единиц в грамме или миллилитре испытуемого продукта.
При испытании трансдермальных пластырей 50 мл образца А фильтруют по отдельности через каждый из двух стерильных мембранных фильтров. Одну мем-
брану помещают на агаризованную среду В # или среду №1 для определения общего числа аэробов, а другую мембрану - на агаризованную среду С # или среду №2 для подсчета грибов.
МЕТОДЫ ЧАШЕЧНОГО ПОДСЧЕТА
A. Метод глубинного посева. Используют чашки Петри диаметром 9 см. В каждую чашку помещают 1 мл образца, подготовленного в соответствии с указаниями раздела «Подготовка образца», и 15-20 мл расплавленной агаризованной среды, подходящей для культивирования бактерий (например, среды В или среды №1) или 15-20 мл расплавленной агаризованной среды, подходящей для культивирования грибов (например, среды С или среды №2), при температуре, не превышающей 450С. Если используются чашки Петри большего размера, то соответственно увеличивают количество агара. Готовят для каждой среды не менее двух чашек с каждым из разведений. Чашки инкубируют при температуре от 300С до 350С (от 200С до 250С для грибов) в течение 5 дней, если за более короткое время не могут быть получены достоверные результаты. Выбирают чашки, соответствующие одному разведению, на которых максимальное число колоний менее 300 (100 для грибов). Вычисляют среднее арифметическое значение числа колоний и определяют количество колониеобразующих единиц в грамме или миллилитре.
B. Метод поверхностного посева. Используют чашки Петри диаметром 9 см. В каждую чашку помещают 15-20 мл расплавленной агаризованной среды, подходящей для культивирования бактерий (например, среды В или среды №1) или 15-20 мл расплавленной агаризованной среды, подходящей для культивирования грибов (например, среды С или среды №2), при температуре около 450С и дают среде застыть. Если используются чашки Петри большего размера, то соответственно увеличивают количество агара. Чашки сушат, например, в условиях ламинарного потока воздуха или в инкубаторе. Отмеренный объем образца, подготовленного в соответствии с указаниями раздела «Подготовка образца», составляющий не менее 0,1 мл, распределяют по поверхности среды. Готовят для каждой среды не менее двух чашек с каждым из разведений. Инкубацию и подсчет количества колониеобразующих единиц производят в соответствии с вышеприведенными указаниями для метода глубинного высевания.
